層析與電泳方法

尺寸排阻層析

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想像一座滿是小側室的迷宮,各種身材的人在其中遊走。小孩子總愛鑽進每一間小室,於是要花很久才到出口;而高大的成年人擠不進去,便徑直沿走廊大步前進,最先走完。尺寸排阻層析分離分子正是這種「大的先出」的顛倒次序:按大小分,最大的最先離開。

嚴格地說,尺寸排阻層析按分子能鑽進多孔固定相孔隙的深淺來分離它們。大分子被多數孔隙拒之門外,只能走開闊的空間,因而很快離開層析柱;小分子鑽進孔隙、走更長的路,便較晚流出。理想情況下分子完全不黏附填料——分離純粹來自每種分子所能探索的體積。

它之所以重要,是因為它溫和而可預測,最適合按質量給蛋白質、聚合物等大分子分類,也適合把樣品換進新鮮的緩衝液。它誠實的局限是分辨率一般且尺寸窗口固定:每根柱子只能在一定的尺寸範圍內分離,大小太接近的分子,或意外黏上填料的分子,都無法乾淨地分開。

生化學家把蛋白質混合物上樣到凝膠過濾柱上;大的蛋白質複合物最先衝出,小小的鹽離子遠遠落後,於是她能收集到乾淨、無鹽的純化複合物組分。

大分子繞過孔隙最先離開;小分子被繞了遠路最後離開。

用已知質量的分子標定層析柱後,尺寸排阻層析還能估算未知蛋白質或聚合物的分子量。

又稱
SEC尺寸排阻色谱法gel filtration chromatographygel permeation chromatography