層析與電泳方法
親和層析
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想像一道門口掛著恰好一種形狀的鉤子,只有你那件特定的外套才掛得上去。一大群人魚貫而過,但唯有穿那件外套的人被勾住、被留下;其餘的都徑直走過。親和層析就是這樣工作的——固定相上帶著一把只抓住某一種特定分子、對其餘視而不見的「鎖」。
嚴格地說,親和層析靠一種高度特異、可逆的生物結合來分離目標分子——抗體對抗原、酶對底物類似物,或帶標籤的蛋白質對金屬離子。一個結合配體被固定在固定相上;樣品流過時,目標結合並被留住,其餘一切被洗去,隨後通過改變條件打斷這種結合,把純化的目標釋放出來。
它之所以重要,是因為它能一步之內把單一想要的分子從極其複雜的混合物中拉出來,其純度和選擇性是任何通用方法都比不上的——它是蛋白質和抗體純化的支柱。它誠實的告誡是:它需要一個特異的結合配體,而這可能昂貴或難尋;溫和的結合可能脆弱;而強到足以釋放被緊緊結合之目標的條件,有時也會損傷它。
為從一瓶細胞培養液中純化一種抗體,生化學家讓培養液流過一根帶有該抗體特異抗原的層析柱;唯有這種抗體黏住,其餘一切被洗去,隨後一次溫和的 pH 改變便把它幾乎純淨地釋放出來。
一種「鎖與鑰匙」式的結合抓住一個目標分子,讓其餘一切沖過。
一種常見形式是組胺酸標籤柱:蛋白質上經基因添加的標籤結合固定的金屬離子,使這一種蛋白質得以按需被捕獲和釋放。
又稱
另見