層析與電泳方法

逆相層析

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想像一隻油膩的煎鍋,一股肥皂水沖刷而過。油膩的碎屑黏在油上不動,而任何親水的東西都被直接沖走。逆相層析依的正是這個日常道理:油膩的表面抓住油性分子,含水的流動相則把親水的迅速帶走。

嚴格地說,逆相層析用一種非極性(拒水)的固定相——通常是塗了長烴鏈的矽膠——配上極性(富水)的流動相。親水的化合物在油膩表面停留極短,早早流出;而油性、非極性的化合物黏附其上、較晚流出;用甲醇或乙腈等有機溶劑增強流動相,便能哄出更黏的那些。

它之所以重要,是因為大多數受關注的分子——藥物、肽、天然產物、許多污染物——都帶幾分油性,又能溶於本模式所用的安全、廉價、以水為基礎的溶劑,使逆相成為迄今最常見的 HPLC 形式。它誠實的告誡是:極性很強或帶電的化合物幾乎不與油膩表面作用、會一起沖過,所以常需換一種模式或做化學修飾才能保留它們。

為測定軟飲料中的咖啡因,分析師用一根逆相 C18 層析柱配水-甲醇流動相;極性的糖類幾乎立刻沖過,而較油性的咖啡因恰好被保留得久一些,給出一個乾淨、分離良好的峰。

油膩的表面加上含水的溶劑:油性的逗留,親水的沖走。

之所以叫「逆相」,是因為它把較早的正相佈置顛倒了過來:正相是極性表面留住親水化合物、油性溶劑帶走其餘——而這裡兩相的極性互換了。

又稱
RPCRP-HPLC反相色谱法reverse-phase chromatography