層析與電泳方法

梯度沖提

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想像哄一屋子害羞程度迥異的客人出來:你先發出溫和的邀請,急切的先離開;然後一步步加大誘惑,連最不情願的也終於出來了。梯度沖提用化學手段做這件事——它在一次運行中穩步增強流動相,好讓連最被牢牢抓住的化合物最終也被沖下層析柱。

嚴格地說,梯度沖提是一種層析技術:在分離過程中連續地或分步地改變流動相的組成,通常使它越來越強地把化合物從固定相上拉下來。在溫和的起始條件下,弱保留的成分早早流出;隨著流動相增強,更強保留的成分依次被釋放。

它之所以重要,是因為它能讓一次運行處理那些成分黏性差異極大的混合物——這正是固定流動相難以應付的,會讓早出的峰擠成一團、晚出的峰又寬又慢。它誠實的代價是增添了複雜性:系統須在兩次運行之間重新平衡回起始條件,梯度較難精確重複,而緩慢漂移的基線還會使最小的峰更難辨認。

為分析一份草藥提取物,化學家用以水為主的流動相開始 HPLC 運行,並在二十分鐘內逐步提高甲醇比例,於是親水的糖類早早流出,而油性的黃酮類在接近末尾時被哄出。

隨著運行進行增強流動相,依次放出更黏的化合物。

梯度沖提與等度沖提相反,後者在整個運行中保持流動相組成不變。

又稱
梯度洗脱法gradient elution chromatography