層析與電泳方法
高效液相層析
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想像用麵粉代替粗濾紙來過濾咖啡:粉末太細,水自己根本滴不下去,於是你只好加壓把它壓過去。高效液相層析(HPLC)做的正是這件事——它把極細的顆粒填進層析柱以獲得銳利的分離,再用一台強力泵把液體強行壓過這些顆粒。
嚴格地說,HPLC 是一種液相層析:流動相被高壓泵送,穿過填滿了極小固定相顆粒的層析柱。微小的顆粒讓每種化合物在兩相之間快速而頻繁地交換,從而把譜帶保持得很窄;泵則提供在如此緊實的填充床中維持有用流速所需的推力。分開的成分一個接一個離開層析柱,經過檢測器被記錄下來。
它之所以重要,是因為 HPLC 能分離複雜的不揮發或對熱敏感的物質——藥物、蛋白質、維生素、污染物——這些是氣相層析處理不了的,而且分離又快又可重複。它誠實的難處在於昂貴與嬌氣:儀器價格不菲,高壓要求管路滴水不漏,髒樣品或氣泡都能毀掉一次分離,所以好的 HPLC 離不開細心的樣品製備和維護。
製藥實驗室把碾碎的藥片溶解,將溶液泵入反相 HPLC 層析柱,十分鐘內便讀出活性藥物及其每一種降解產物各自的峰,並測出每種物質的含量。
細顆粒加上高壓泵,帶來又快又銳利的液相分離。
字母「P」曾代表「壓力(pressure)」,如今通常讀作「效能(performance)」,以體現真正帶來銳利分離的是細顆粒,而非壓力本身。
又稱
另見