基因工程与重组DNA

限制性内切酶

想象一把分子剪刀,只在看到一个精确短语的地方才下剪,对其余文字一概不理。限制性内切酶正是这样一种工具:它是一种蛋白质,沿着DNA扫描,只在它所识别的特定短序列处把链切开,其余各处都保持完整。

识别位点通常很短,往往只有四到八个碱基对长,而且许多是回文序列——在两条链上沿相反方向读起来一模一样。视酶的不同,切口产生的或是平末端,或是带单链突出的交错末端。已知的限制性内切酶有数百种,各有自己的识别序列,这让研究者能在可预测、可选择的位置切开DNA。

限制性内切酶是天然存在的:细菌把它们当作一套防御系统,切碎入侵病毒的DNA,同时通过化学标记保护自己的基因组。它们的发现给了分子生物学家精确的切割工具,使重组DNA成为可能;即便在更新的方法出现之后,它们仍是实验室里的主力。

为了克隆一个基因,研究者用同一种限制性内切酶切割基因DNA和质粒,使它们匹配的末端能像拼图碎片一样拼合在一起。

用同一种酶切割两段DNA,会产生互补的末端,随时可以连接。

EcoRI酶识别GAATTC序列,在每条链上的G与A之间切开,留下相同的四碱基黏性末端,可与任何被同一种酶切过的DNA重新配对。

又称
restriction endonuclease限制性核酸内切酶限制性核酸內切酶