基因工程与重组DNA
DNA连接酶
如果说限制性内切酶是切开DNA的分子剪刀,那么DNA连接酶就是把它重新粘合起来的分子胶水。它是一种封合DNA骨架断口的酶,能把两个片段融合成一条连续的链。
更准确地说,它在一条DNA链的游离末端与另一条链的起点之间形成磷酸二酯键,填补糖-磷酸骨架上的缺口。当两个片段被凑到一起——比如靠互补的黏性末端松散地配对——连接酶就让这一连接变得永久而共价,使整条分子表现得像一段完整无缺的DNA。
DNA连接酶不只是一种实验室工具;细胞时时刻刻都离不开它。它封合DNA复制时后随链上合成的短片段,也帮助修复损伤造成的断口。在基因工程中,它是限制性内切酶不可或缺的搭档:用一种酶切开,用另一种酶接上,你就能按需搭建出重组分子。
当一个基因和一个切开的质粒通过黏性末端配对后,DNA连接酶封合那两个切口,把它们焊接成一个完整的重组环。
碱基配对把碎片固定住,连接酶则让连接变得永久。
连接酶也能连接平末端,但这种反应比连接匹配的黏性末端要慢、效率也更低,因为黏性末端的突出部分会先通过碱基配对把片段固定到位。
另见