重組DNA與分子選殖

多選殖位點(multiple cloning site)

/ MCS /

想像一條工具腰帶,每件工具都有一個槽位,全都整齊地排列在一處。多選殖位點就是載體上一小段DNA,裡面密集排著一連串不同的限制位點,全都集中在一個整潔的區域——一條專門設計的「著陸跑道」,你可以在這裡切開載體、插入你的基因。

多選殖位點(MCS,也叫多接頭)是一段合成的序列,長約50到100個鹼基對,經過設計使其聚集著許多獨特的限制位點——如EcoRI、BamHI、HindIII等,每個在整個載體中都只出現一次。「獨特」是關鍵:因為每種酶在MCS中只切它那一個位點,你就能在恰好選定的一處乾淨地切開載體,而不在別處把它切碎。更妙的是,你可以用兩種不同的酶切割,造出兩個不同的黏性末端,再連接進一段用同樣兩種酶處理過的插入片段,使它只能以一種朝向進入——這就是定向選殖。

MCS是選殖載體在實踐中的核心。它給你一份靈活的切點菜單,讓你能針對特定的插入片段選用任何方便的酶。在許多載體中,MCS被巧妙地安放在一個報告基因片段(lacZ基因)內部,於是成功在此插入DNA會破壞該報告基因——這正是藍白篩選區分重組菌落和空載菌落的依據。

要做定向選殖,用EcoRI切載體MCS的一端、用BamHI切另一端,得到兩個不同的突出端。把你的插入片段也製備成EcoRI端和BamHI端。這樣插入片段只能以一種方式連接——它的EcoRI端對上載體的EcoRI端——於是基因每次都以正確的方向進入。

MCS中用兩種不同的酶,迫使插入片段以一種朝向進入。

MCS中的限制位點只有在它對載體是獨特的、且不會同時切在你的插入片段內部時才有用——務必檢查你選的酶在你想保持完整的基因內部沒有位點。

又稱
MCSpolylinker多克隆位点多接头