重組DNA與分子選殖

黏性末端與平末端(sticky and blunt ends)

剪一條拉鏈時,你可以在同一處把兩排齒一齊剪斷,也可以把一排剪得比另一排靠前一點。第一種留下齊平的邊;第二種在一側留下一小段齒,可以去鉤住另一條拉鏈上匹配的一段。限制酶也以這兩種方式切割DNA,分別得到平末端和黏性末端。

DNA有兩條鏈。如果酶在完全相同的位置切斷兩條鏈,結果就是平末端:一個沒有突出的平整雙鏈邊緣。如果酶把兩條鏈錯開幾個鹼基切割(交錯切割),每個片段就以一小段單鏈突出收尾——這就是黏性末端(也叫黏端)。由於酶在各處都做同樣的交錯切割,它產生的每個黏性末端都有相同的突出序列。這些突出端是互補的,因此會透過鹼基配對自發地配上:一個片段的 5'-AATT 突出端會找到並與同一種酶切出的任何其他片段上的 AATT 突出端雜交。這短暫的鹼基配對把片段拉在一起,足以讓一種酶來把它們封住。

黏性末端對選殖是一份厚禮,因為它讓連接既高效又有方向性:用同一種酶切割的兩個DNA會在它們互補的突出端處咬合。平末端更通用——任何平末端都能與任何其他平末端連接,與序列無關——但連接效率較低,也無法控制方向。一個常用技巧是用兩種不同的酶切割質粒,使其兩端是不同的黏性末端,從而迫使插入片段只能以一種朝向落入(定向選殖)。

EcoRI做交錯切割,留下 5'-AATT 突出端(黏性)。SmaI把 5'-CCC|GGG-3' 一齊切斷,留下平整的邊(平末端)。把兩個EcoRI切過的DNA混在一起,它們的AATT突出端會彼此找到並配對;把兩個SmaI切過的DNA混在一起,它們也能連接,但只能靠隨機的端對端碰撞。

黏性末端靠鹼基配對預先對齊;平末端只是碰在一起。

黏性末端只是鹼基配對,並不會自行形成共價鍵。片段仍帶有缺口,在DNA連接酶從化學上封住骨架之前會重新散開。

又稱
cohesive endsoverhangs黏端平端黏性末端