重組DNA與分子選殖

藍白篩選(blue-white screening)

轉化之後,你的抗生素平板上布滿了菌落——但有些攜帶的是帶你插入片段的載體,有些攜帶的是沒裝上插入片段、只是自己重新閉合的空載體。你需要一種快速的視覺方法來分辨二者。藍白篩選把這個問題變成了一種顏色:重組菌落長成白色,空載體菌落長成藍色。

這個把戲用到了lacZ基因,其蛋白(β-半乳糖苷酶)能把一種叫X-gal的無色實驗試劑分解成鮮藍色的產物。載體帶有lacZ的前段,而多選殖位點恰好嵌在那段片段內部。如果載體是空的,lacZ保持完整,酶起作用,菌落在含X-gal的平板上變藍。但如果你的插入片段被連接進了選殖位點,它就打斷了lacZ,酶被破壞,X-gal保持無色,菌落長成白色。於是看一眼平板就能給菌落分類:白色意味著「有插入片段」,藍色意味著「空載體」。

藍白篩選是單靠選擇無法提供的那道經典的第二層過濾。選擇(抗生素)告訴你細胞有載體;藍白篩選告訴你那個載體是否真的帶有插入片段。你挑出白色菌落去擴大培養並進一步分析。它快速、廉價、直觀——但並不完美:一個不破壞閱讀框的插入片段,或一個很小的插入片段,有時會讓lacZ部分仍能工作,給出誤導性的淺藍菌落,所以白色菌落仍需用其他方法確認。

把轉化後的細胞塗在含氨苄青黴素(用於選擇載體)、X-gal和IPTG(用於開啟lacZ)的瓊脂上。藍色菌落=空載體,lacZ完整。白色菌落=插入片段打斷了lacZ。挑一個白色菌落去擴大培養你感興趣的基因。

白色=插入片段打斷了lacZ;藍色=lacZ完整,空載體。

白色並不保證插入片段正確——它只說明lacZ被打斷了;菌落可能攜帶大小不對或發生重排的片段,所以白色候選者仍要用限制酶酶切或定序來核實。

又稱
blue/white selectionlacZ alpha-complementation screen蓝白斑筛选蓝白选择