苗頭辨識與篩選

生化檢測法

生化檢測法是把化合物針對標靶蛋白本身來測試——把蛋白純化出來、置於試管中,剝離了細胞及其一切複雜性。這就像把鎖從門上卸下、放到工作台上來試鑰匙:你能確切看到鑰匙如何契合這把鎖,而不被周圍的房子干擾。

通常把純化的標靶(一種酶、受體或其他蛋白)與其受質或配體以及被測化合物置於規定的緩衝液中,由一個乾淨的讀出報告結果——對酶而言是產物生成的速率,對結合交互作用而言是標記配體被置換的程度。由於體系只含已知成分,數據界定清晰、易於定量解讀,且非常適合測量IC50和抑制常數等精確的效力值。

這種乾淨的代價是失去情境。生化檢測法對化合物能否穿過細胞膜、能否抵禦代謝,或能否在活體系統內擊中標靶都一無所知,而純化的蛋白可能採取某種構象,或缺少細胞中存在的夥伴分子。這正是生化檢測法通常要與細胞檢測法配對的原因——後者以犧牲清晰度為代價恢復了生物學情境。

把純化的蛋白酶與螢光受質混合;被測化合物的IC50直接由它使螢光增長減慢的程度讀出。

僅含純化成分,生化檢測法給出乾淨、定量的效力。

生化檢測法中的效力常與細胞中的效力不同:一個化合物在試管裡可能是強效酶抑制劑,卻因進不了細胞而在細胞中很弱,反之亦然。兩種讀出是互補的,不能互相替代。

又稱
in vitro biochemical assay体外生化检测法體外生化檢測法