苗頭辨識與篩選
檢測法
檢測法其實就是一種你信得過的測量:一套規定好的實驗流程,把看不見的事件——比如分子結合到蛋白上,或某種酶變慢——轉化成可讀的數字。可以把它想成為生物學精心校準的體重秤,只不過它報出的不是體重,而可能是螢光、顏色或反應進行的快慢。
每種檢測法都有讀出指標(你實際測量的量)、對照(答案已知、用來設定高低標尺的樣品),以及二者之間的視窗,讓你能區分「發生了變化」與「什麼都沒發生」。常見的讀出包括螢光、發光、吸光度、放射性以及細胞計數。化合物的作用相對於這些對照來表達,常以抑制率或激活率的百分數給出。
同一個生物學問題可以用很不同的檢測法來問,而選擇會影響你找到什麼。純化蛋白檢測法乾淨,卻可能漏掉只在細胞內發生的生物學;基於細胞的檢測法更真實,但更難解讀。好的檢測法靈敏、可重複、抗干擾,並且穩健到能運行上千次而不漂移——這些性質可用Z因子等品質指標來概括。
一種酶檢測法以螢光產物生成的速率來報告活性;某化合物相對於無抑制劑對照使速率下降80%,則記為80%抑制。
檢測法把分子事件轉化成相對於固定對照的可比數字。
檢測法測的是它被設計來測的東西,未必是你想知道的東西。一種能淬滅螢光的化合物可能看起來像抑制劑,卻根本沒碰到標靶——這正是需要正交檢測法的原因。
又稱
另見