苗头识别与筛选
表面等离子体共振
表面等离子体共振(SPR)是一种实时观察分子贴上靶点又松开的方法,无需给分子附加任何标签或标记。可以想象一个灵敏到能感知微小额外重量的传感表面:每当有东西结合到固定在其上的蛋白上,它就感觉到那一点点重量;当那东西离开时,又感觉到重量被卸下。
在物理上,靶点蛋白被固定在镀有薄金层的传感芯片上,被测化合物的溶液流过它。结合改变了表面的质量,从而改变了金膜中电子(等离子体)吸收光的角度。仪器把这一变化记录成实时曲线:化合物结合时信号上升(结合),解离时信号下降(解离)。
由于它直接且随时间地观察结合,SPR得到的不仅是化合物是否结合、结合得多紧(亲和力),还有它结合与解离的快慢——结合与解离的动力学,以及驻留时间。这使它成为片段筛选和苗头确认的主力,在这些场合,确认一个真实、直接的结合事件及其动力学比单一的活性数值更重要。它的局限在于固定蛋白可能扰动蛋白,而极弱或极非特异的结合物需要谨慎的对照。
在一次片段筛选中,SPR把一个传感图干净、随剂量变化的真结合物,与一个信号嘈杂、不饱和、暴露出假象的聚集体区分开来。
一条干净、随剂量变化的SPR传感曲线,确认与靶点的直接、真实结合。
SPR的独特威力在于动力学:两个亲和力相同的化合物,其结合与解离速率可能大不相同,而长驻留时间(解离速率慢)对药效的影响往往比单纯的平衡亲和力更大。
又称
另见