重组DNA与分子克隆

选择性标记(selectable marker)

当你用质粒转化细菌时,大多数细胞并不会吸收它——只有一小部分成功。你需要一种办法在草垛里找出那几根针:一项测试,杀掉失败者,让成功者存活。选择性标记就是载体上的一个基因,它在选定的条件下给宿主带来生存优势,于是只有携带载体的细胞能活下来。

最常见的选择性标记是抗生素抗性基因——例如一个其蛋白能分解或泵出抗生素氨苄青霉素的基因。你把转化后的细菌涂在掺有氨苄青霉素的琼脂平板上。吸收了质粒的细胞带有抗性基因,制造出保护性蛋白,长成菌落;没有吸收质粒的细胞毫无保护,死去。平板替你完成了筛选:你看到的每一个菌落都必定含有载体。其他标记的原理是提供宿主自己无法合成的某种营养物,于是只有带载体的细胞能在基本培养基上生长。

选择正是让克隆变得可行的那一步——没有它,你就得在十亿个看起来一样的菌落里大海捞针,去找那个罕见的成功者。请注意一个重要区别:选择性标记告诉你细胞吸收了载体,却不告诉你你的插入片段是否真的在载体里。第二个问题——空载体还是重组载体——要由另一个筛选步骤回答,比如蓝白筛选。

用一个含氨苄青霉素抗性的质粒转化大肠杆菌,涂在氨苄青霉素平板上。第二天你看到,比如说,一块原本起始于数百万细胞的平板上有200个菌落。这200个正是吸收了质粒的细胞;那数百万个没吸收的,已被抗生素在一夜之间杀死。

平板里的抗生素杀死所有缺乏抗性标记的细胞。

选择确认的是载体被吸收,而不是你的基因被插入——一个空载体重新环化后照样能在抗生素下存活,这正是还需要第二步筛选重组体的原因。

又称
selection markerantibiotic resistance marker选择标记筛选标记