色谱与电泳方法
反相色谱
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想象一只油腻的煎锅,一股肥皂水冲刷而过。油腻的碎屑黏在油上不动,而任何亲水的东西都被直接冲走。反相色谱依的正是这个日常道理:油腻的表面抓住油性分子,含水的流动相则把亲水的迅速带走。
严格地说,反相色谱用一种非极性(拒水)的固定相——通常是涂了长烃链的硅胶——配上极性(富水)的流动相。亲水的化合物在油腻表面停留极短,早早流出;而油性、非极性的化合物黏附其上、较晚流出;用甲醇或乙腈等有机溶剂增强流动相,便能哄出更黏的那些。
它之所以重要,是因为大多数受关注的分子——药物、肽、天然产物、许多污染物——都带几分油性,又能溶于本模式所用的安全、廉价、以水为基础的溶剂,使反相成为迄今最常见的 HPLC 形式。它诚实的告诫是:极性很强或带电的化合物几乎不与油腻表面作用、会一起冲过,所以常需换一种模式或做化学修饰才能保留它们。
为测定软饮料中的咖啡因,分析师用一根反相 C18 色谱柱配水-甲醇流动相;极性的糖类几乎立刻冲过,而较油性的咖啡因恰好被保留得久一些,给出一个干净、分离良好的峰。
油腻的表面加上含水的溶剂:油性的逗留,亲水的冲走。
之所以叫“反相”,是因为它把较早的正相布置颠倒了过来:正相是极性表面留住亲水化合物、油性溶剂带走其余——而这里两相的极性互换了。
又称
另见