色谱与电泳方法

梯度洗脱

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想象哄一屋子害羞程度迥异的客人出来:你先发出温和的邀请,急切的先离开;然后一步步加大诱惑,连最不情愿的也终于出来了。梯度洗脱用化学手段做这件事——它在一次运行中稳步增强流动相,好让连最被牢牢抓住的化合物最终也被冲下色谱柱。

严格地说,梯度洗脱是一种色谱技术:在分离过程中连续地或分步地改变流动相的组成,通常使它越来越强地把化合物从固定相上拉下来。在温和的起始条件下,弱保留的成分早早流出;随着流动相增强,更强保留的成分依次被释放。

它之所以重要,是因为它能让一次运行处理那些成分黏性差异极大的混合物——这正是固定流动相难以应付的,会让早出的峰挤成一团、晚出的峰又宽又慢。它诚实的代价是增添了复杂性:系统须在两次运行之间重新平衡回起始条件,梯度较难精确重复,而缓慢漂移的基线还会使最小的峰更难辨认。

为分析一份草药提取物,化学家用以水为主的流动相开始 HPLC 运行,并在二十分钟内逐步提高甲醇比例,于是亲水的糖类早早流出,而油性的黄酮类在接近末尾时被哄出。

随着运行进行增强流动相,依次放出更黏的化合物。

梯度洗脱与等度洗脱相反,后者在整个运行中保持流动相组成不变。

又称
梯度洗脱法gradient elution chromatography