色谱与电泳方法
高效液相色谱
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想象用面粉代替粗滤纸来过滤咖啡:粉末太细,水自己根本滴不下去,于是你只好加压把它压过去。高效液相色谱(HPLC)做的正是这件事——它把极细的颗粒填进色谱柱以获得锐利的分离,再用一台强力泵把液体强行压过这些颗粒。
严格地说,HPLC 是一种液相色谱:流动相被高压泵送,穿过填满了极小固定相颗粒的色谱柱。微小的颗粒让每种化合物在两相之间快速而频繁地交换,从而把谱带保持得很窄;泵则提供在如此紧实的填充床中维持有用流速所需的推力。分开的成分一个接一个离开色谱柱,经过检测器被记录下来。
它之所以重要,是因为 HPLC 能分离复杂的不挥发或对热敏感的物质——药物、蛋白质、维生素、污染物——这些是气相色谱处理不了的,而且分离又快又可重复。它诚实的难处在于昂贵与娇气:仪器价格不菲,高压要求管路滴水不漏,脏样品或气泡都能毁掉一次分离,所以好的 HPLC 离不开细心的样品制备和维护。
制药实验室把碾碎的药片溶解,将溶液泵入反相 HPLC 色谱柱,十分钟内便读出活性药物及其每一种降解产物各自的峰,并测出每种物质的含量。
细颗粒加上高压泵,带来又快又锐利的液相分离。
字母“P”曾代表“压力(pressure)”,如今通常读作“效能(performance)”,以体现真正带来锐利分离的是细颗粒,而非压力本身。
又称
另见