扩增、测序与核酸分析
DNA微阵列(DNA microarray)
/ MY-kro-array /
假设你想一次问上千个问题:基因1在不在、活不活跃?基因2呢?基因3呢?……一直问到两万个。DNA微阵列就是一种在一张玻璃片上同时问出所有这些问题的办法:把成千上万个已知的DNA探针整齐排成方格,看样品会粘到哪些上面。
这块芯片是一格格小点构成的方阵;每个点上密集排布着某一已知单链DNA探针的许多拷贝,而每个点代表哪个基因,由它的位置固定下来。你把样品——比如一个细胞里的全部RNA,转成带荧光标记的cDNA——淌过芯片。凡是样品分子遇到序列匹配的点,就会碱基配对并粘上去(这就是杂交)。洗去未结合的物质后,扫描芯片:每个点的亮度报告样品里有多少匹配序列。读完整个方阵,你就一次性得到了跨越上千个基因的读数。
微阵列是第一种能一次测量整个基因组那么多基因活性的技术,曾掀起一波表达谱分析、基因分型,以及健康与病变组织比较的浪潮。它的关键局限——也是RNA-seq基本将其取代的原因——在于阵列只能检测它的探针所设计针对的东西:你无法发现意料之外的东西,而且亮度与含量之间的关系并不完全定量。它们像是一份只有固定题目的“封闭式问卷”,而测序则是一场开放式的访谈。
在一块基因表达阵列上,代表某个免疫基因的点在感染样品中明亮发光,在健康样品中却暗淡——一眼就看出该基因在感染时被开启,同时还读出了其余成千上万个点的结果。
每个方格点是一个已知探针;亮度报告匹配了多少。
微阵列只能看到它的探针被设计去检测的东西——它无法发现意料之外的东西,且其信号只是半定量,这正是开放式的RNA-seq在基因表达研究中基本取代它的原因。
又称
另见