细胞生物学的方法与工具
细胞分级分离
/ sel frak-shun-AY-shun /
要研究汽车的某一个零件——比如只研究发动机——把车拆开、按大小和重量把零件分门别类会很有帮助。细胞分级分离对细胞做的就是这件事:它轻轻地把细胞破开,再把流出来的细胞器分成几组,于是研究者可以收集到,比方说一管纯净的线粒体或纯净的细胞核,离开整个细胞那拥挤的混杂环境去研究它们做什么。
首先,在冰冷、温和的溶液中把细胞破开(匀浆),这种溶液能让细胞器保持完整。得到的“汤”随后放入离心机中旋转,这台机器让试管高速旋转,于是就像泥浆在搅动过的杯子里沉降那样,较重的颗粒先沉下去。低速旋转会把最大、最重的部分(如细胞核)沉淀到管底;把剩下的液体以更快的速度旋转,会沉淀次重的部分(线粒体),依此类推。这种分步的做法叫做差速离心,它按大小和密度把细胞器分成不同的级分。
细胞分级分离之所以重要,是因为它让生物化学家弄清哪个细胞器承担哪项工作:你可以对一份分离出来的级分测试某个特定的反应,从而了解这个反应在细胞中通常发生在何处。在分子方法出现之前,它是绘制细胞功能图谱的核心手段。它的局限是:把细胞破开会破坏其活体的组织结构,可能损伤或污染脆弱的结构,而且没有任何一份级分能做到完美纯净——因此结果必须用显微术等其他方法加以确认。
为了证明释放能量的呼吸作用发生在线粒体中,科学家对细胞进行分级分离,收集线粒体沉淀,并证明仅凭这一份分离出来的级分就能进行呼吸作用的各项反应。
先慢速旋转分出重的部分,再加快旋转分出轻的部分——按重量把细胞器分类。
没有任何一份级分能做到完美纯净,而把细胞破开会破坏其天然的组织结构——所以分级分离告诉你某个细胞器在试管里能做什么,未必精确等于它在完整活细胞内的行为。
又称
另见