基因工程與重組DNA
DNA連接酶
如果說限制酶是切開DNA的分子剪刀,那麼DNA連接酶就是把它重新黏合起來的分子膠水。它是一種封合DNA骨架斷口的酶,能把兩個片段融合成一條連續的鏈。
更準確地說,它在一條DNA鏈的游離末端與另一條鏈的起點之間形成磷酸二酯鍵,填補糖-磷酸骨架上的缺口。當兩個片段被湊到一起——比如靠互補的黏性末端鬆散地配對——連接酶就讓這一連接變得永久而共價,使整條分子表現得像一段完整無缺的DNA。
DNA連接酶不只是一種實驗室工具;細胞時時刻刻都離不開它。它封合DNA複製時後隨鏈上合成的短片段,也幫助修復損傷造成的斷口。在基因工程中,它是限制酶不可或缺的搭檔:用一種酶切開,用另一種酶接上,你就能按需搭建出重組分子。
當一個基因和一個切開的質體透過黏性末端配對後,DNA連接酶封合那兩個切口,把它們焊接成一個完整的重組環。
鹼基配對把碎片固定住,連接酶則讓連接變得永久。
連接酶也能連接平末端,但這種反應比連接匹配的黏性末端要慢、效率也更低,因為黏性末端的突出部分會先透過鹼基配對把片段固定到位。
另見