複製型DNA聚合酶（replicative DNA polymerase）

如果複製體是工廠，那麼DNA聚合酶就是流水線上真正逐個添加新建材的工人。它是複製的核心酶：讀取一條單鏈DNA，一個核苷酸接一個核苷酸地構建互補的新鏈，並把序列做對。

DNA聚合酶在兩條嚴格的規則下工作，而這兩條規則塑造了複製的一切。第一，它只能把新核苷酸加到正在延長的鏈的3'端，所以新鏈總是沿5'到3'方向生長（而模板被按3'到5'方向讀取）。第二，它不能從零開始一條鏈——它必須延伸某個已有引物的游離3'端。每走一步，它選出其鹼基能與模板正確配對的核苷酸（A對T，G對C），形成一個磷酸二酯鍵把它加上去，然後繼續。許多複製型聚合酶還自帶一個3'到5'方向的校對外切酶，能在繼續之前倒回去移除一個錯誤鹼基，從而帶來極高的準確度。

不同生物使用不同的複製型聚合酶——像大腸桿菌這樣的細菌用DNA聚合酶III；真核生物用δ和ε聚合酶——但其化學和規則是相同的。這兩條規則合在一起（只能5'到3'、需要引物），正是為什麼一條鏈被順暢地複製（前導鏈），而另一條必須分段構建（後隨鏈）。細胞還有用於修復和跨越損傷的其他聚合酶，但複製型聚合酶是專為複製整個基因組而生的那個又快又準的酶。