苗頭辨識與篩選

反向篩選

在初篩標出一些苗頭之後,反向篩選是你專門用來抓「作弊者」的第二道測試——那些得分並非因為擊中了預期標靶,而是因為愚弄了檢測法或擊中了不該擊中之物的化合物。它是反過來問的對照問題:不是問「它有效嗎?」,而是問「它是不是因為錯誤的原因才有效?」

反向篩選有幾種類型。假象反向篩選檢查對檢測系統本身的干擾——例如在沒有標靶的情況下運行讀出化學,以抓出那些淬滅螢光或干擾訊號的化合物。選擇性反向篩選把苗頭針對一個密切相關的脫靶(如同源的酶)測試,以標出濫交的結合物。反標靶篩選則檢查針對某蛋白的活性,因為抑制該蛋白要麼是不希望的,要麼會過於輕易地解釋掉某個表型。

按設計,一個苗頭應在初篩中有活性、在相應的反向篩選中無活性;在兩者中都亮起的化合物幾乎總是假象或非選擇性結合物,會被降級處理。反向篩選是苗頭確認與分流的核心環節,把原始、含雜訊的苗頭清單變成一組更小的、真實且作用於標靶的化合物。

把基於螢光的酶篩選得到的苗頭放入一個不含該酶的反向篩選;仍產生訊號的化合物被揭露為光學干擾物並予以剔除。

反向篩選揭露那些靠干擾、而非真正作用於標靶而得分的化合物。

其邏輯與初篩相反:在這裡,有活性才是壞結果。一個乾淨的苗頭在初篩中強效、在反向篩選中卻毫無反應——相反的模式通常意味著假象或缺乏選擇性。

又稱
counter-assay对照筛选對照篩選