细胞生物学的方法与工具

蛋白质印迹(Western 印迹)

/ WES-tern blot /

假设你想就细胞样本中某一种特定的蛋白质回答两个问题:它到底在不在,以及它有多少。蛋白质印迹正是做这件事的经典方法。它先把细胞里所有的蛋白质按大小铺展开来,再用一种特异形状的抗体作为探针,挑出并显现你所关心的那唯一一种蛋白质——确认它是否存在,以及它大致有多丰富。

这个方法分步进行。先用凝胶电泳按大小把蛋白质分离,最小的跑得最远。分离开的蛋白质随后从凝胶中转移(“印”)到一张能把它们固定住的薄膜上。把一种针对目标蛋白质的特异抗体洗过薄膜,它只粘附到自己的目标上;接着第二种带标记的抗体再附上去,恰好在目标所在之处产生一个可见的信号——一条深色的带或一团光。带的位置揭示蛋白质的大小,带的深浅则大致反映存在的量。

蛋白质印迹是确认某种特定蛋白质是否存在、检查其大小、以及在不同样本之间比较其多少(例如病变细胞中某蛋白质比健康细胞更多)的标准手段。它的准确性取决于抗体是否真正特异,这一点和免疫染色一样。它顶多算半定量——适合判断“多”与“少”,而非精确的数字——而且和所有依赖抗体的方法一样,如果抗体结合了错误的蛋白质,一条看起来干净的带也可能具有误导性,所以细致的对照不可或缺。

为了检查某种处理是否提升了一种关键蛋白质,研究者对处理过和未处理的细胞做蛋白质印迹;处理过那一道更深的带表明,现在那种蛋白质的量更多了。

先按大小分离蛋白质,再用抗体探测,显现选定的那一个目标。

蛋白质印迹只是半定量的,其可靠程度也仅取决于所用抗体:它显示的是大致的“多”与“少”,而如果抗体结合了意外的蛋白质,一条令人信服的带也可能是错的,所以对照很重要。

又称
immunoblotprotein blot免疫印迹西方墨點法