细胞生物学的方法与工具
免疫染色
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假设你想在细胞内挤作一团的成千上万种蛋白质中,找出某一种特定蛋白质的每一个拷贝——这是在一堆针里找一根针。免疫染色借用了人体自身的“搜索—识别”机器来解决这个难题:抗体,免疫系统的蛋白质侦探,每一种都被塑造成只去扣住某一个特定的目标。给这样一个抗体附上一个可见的标记,你就能让选中的那一种分子,无论它在细胞何处,都亮起来。
首先,把一种识别目标蛋白质的一抗加到已固定(保存好)的细胞上;它只与自己特定的目标结合。然后再加入携带荧光染料或显色酶的二抗,二抗会粘附到一抗上。二抗常常成倍地结合,从而放大信号,让即使稀少的蛋白质也能显现出来。这时在显微镜下,目标蛋白质就在它所处的确切位置发光或显色,而其余一切保持黑暗——既揭示出某蛋白质是否存在,又揭示出它究竟在细胞的哪个部位。
免疫染色是定位细胞和组织中特定分子最有力的手段之一,从科研到医学诊断处处都在使用(例如,通过细胞携带哪些蛋白质来判断癌症类型)。它的准确性完全依赖于抗体是否真正具有特异性;选得不好的抗体可能结合错误的对象,产出一张漂亮却具误导性的图像。细胞通常必须先被杀死并固定,所以免疫染色捕捉的是一个被冻结的瞬间,而非活生生、不断运动的过程。
一名病理学家对肿瘤样本进行免疫染色,检测一种只在某些癌症中出现的蛋白质;在显微镜下发光的细胞确认了诊断,而相邻的健康细胞则保持黑暗。
抗体充当分子地址查找器,无论选定的那种蛋白质在哪里,都把它点亮。
结果可靠到什么程度,取决于抗体有多特异:非特异的抗体可能结合错误的蛋白质,给出令人信服却虚假的图像,因此良好的对照不可或缺。
又称
另见