扩增、测序与核酸分析

Taq聚合酶(Taq polymerase)

/ TACK polymerase /

PCR需要把DNA一次又一次加热到接近沸腾,以把两条链拉开。问题是:普通的复制酶在第一个循环里就会被这种高温烫熟而失活。解决办法来自一个出人意料的地方——一种生活在滚烫温泉里的微生物。Taq聚合酶就是那种耐热的DNA复制酶,正是它让PCR变得切实可行。

Taq是Thermus aquaticus(一种水生栖热菌)的简称,它发现于黄石公园的温泉,能在接近沸水的环境中繁盛。它的DNA聚合酶进化得能在那样的温度下保持折叠、继续工作,从而挺过每个PCR循环里约95摄氏度的变性步骤。和其他DNA聚合酶一样,它读取单链模板、需要引物起头、沿5'到3'方向逐个添加新的核苷酸,使A配T、G配C。因为它耐热,你只需在开头加一次酶,让它跑完全部三十多个循环,而不必每轮都打开管子补加新酶。

在Taq出现之前,PCR是个笨拙的苦差:每次加热都会杀死酶,所以每个循环都得人工补加。Taq把PCR变成可在热循环仪里自动运行的单管封闭反应——这才是PCR成为常规工具的真正原因。一个诚实的提醒:普通Taq没有校对功能,因此偶尔会出复制错误。对要求序列忠实的应用,实验室会改用带校对功能的“高保真”聚合酶(如Pfu)。

研究者配好一管PCR,里面有模板、引物、四种核苷酸原料、含镁的缓冲液,以及一份Taq。把管子放进循环仪,无人值守地跑上数小时——耐热的Taq挺过每一次95度的熔解,一路复制到最后。

耐热的酶能挺过每一次变性步骤。

标准Taq没有校对功能,因此偶尔出错;当需要精确序列时,应改用带校对功能的高保真聚合酶。Taq的发现也是“对极端环境微生物的基础好奇心意外得到回报”的经典例子。

又称
TaqTaq DNA polymerase耐热DNA聚合酶