向导 RNA

向导 RNA 是告诉 Cas9 该去哪里的地址标签。Cas9 在每项任务中都一样;变化的是它携带的那段短 RNA 序列,它拼写出靶点。换一段向导,就能把这把剪刀重新指向一个完全不同的基因——正是这种可互换性让 CRISPR 如此灵活。

向导 RNA 含有一段约 20 个核苷酸的区段(间隔序列),它通过维系双螺旋的那种 A–T、G–C 互补配对与 DNA 靶点配对。它还包含一段供 Cas9 抓握的结构支架部分。间隔序列的序列由实验者选定,因此几乎可以针对任何挨着合适 PAM 的位点进行编程。

在细菌中,向导由两条独立的 RNA(crRNA 和 tracrRNA)构成。为方便起见,实验室工具通常把它们融合成一条单一分子,称为单向导 RNA。设计好的向导很重要:选得不好的向导可能在别处结合相似但错误的序列,造成脱靶编辑。