前间隔序列邻近基序

PAM 是 DNA 在 Cas9 切割之前必须出示的微型“口令”。即使向导 RNA 完美匹配,只要旁边没有一段特定的短序列,Cas9 也会忽略该位点。可以把它想成一位门卫,先查验徽章再放剪刀进入。

PAM 代表“前间隔序列邻近基序”:紧挨靶点的一段短 DNA 序列(对常用的化脓性链球菌 Cas9 而言,是 NGG 三个字母,其中 N 为任意碱基)。Cas9 先识别 PAM,再解开邻近的 DNA,检验向导 RNA 是否与之配对。没有 PAM,就不切割。

PAM 的演化是一种巧妙的“自我与非我”识别:细菌存储病毒间隔序列时不带邻近的 PAM,因此 Cas9 攻击病毒 DNA,却放过细菌自己存档的副本。对编辑而言,PAM 的要求限制了可靶向的位点,不过具有放宽或改变 PAM 规则的工程化 Cas 变体如今扩大了可触及的基因组范围。