基因工程与重组DNA

凝胶电泳

想象一群人被要求穿过密密的灌木丛冲向终点线:身材小巧、灵活的人很快就钻了过去,而高大的人却被缠住、落在后头。凝胶电泳分离DNA片段的方式与此十分相似,它按大小把混合物分开,让你看清其中含有哪些长度的片段。

DNA被加入一块凝胶(一种果冻状的网眼物质)一端的样品孔中,然后接通电场。由于DNA骨架带负电,每个片段都被拉向正极。凝胶的网眼阻碍它们移动,较短的片段比较长的片段穿过得更快,于是随着时间推移,片段们按长度散开,形成一条条分离的条带。

电泳结束后,对DNA进行染色,使条带显现出来,再把它们的位置与一组已知大小的标准(即标记物)比较,来估算每个片段的长度。这是一种简单而日常的技术,用来检查酶切或PCR的结果、确认某个片段的大小,或纯化某一特定条带——堪称分子生物学实验室的一种基本感官。

用限制性内切酶切开质粒之后,研究者把产物在凝胶上电泳;出现两条条带,证实DNA被切成了两个预期大小的片段。

条带出现在预期位置,证实酶切如计划般成功。

同样的分离原理,配上合适的凝胶和条件,也适用于蛋白质和RNA;对DNA而言,琼脂糖凝胶适合较大的片段,而更精细的聚丙烯酰胺凝胶能分辨仅相差一个碱基的片段。

又称
agarose gel electrophoresis琼脂糖凝胶电泳瓊脂糖凝膠電泳