擴增、定序與核酸分析

Taq聚合酶(Taq polymerase)

/ TACK polymerase /

PCR需要把DNA一次又一次加熱到接近沸騰,以把兩條鏈拉開。問題是:普通的複製酶在第一個循環裡就會被這種高溫燙熟而失活。解決辦法來自一個出人意料的地方——一種生活在滾燙溫泉裡的微生物。Taq聚合酶就是那種耐熱的DNA複製酶,正是它讓PCR變得切實可行。

Taq是Thermus aquaticus(一種水生棲熱菌)的簡稱,它發現於黃石公園的溫泉,能在接近沸水的環境中繁盛。它的DNA聚合酶演化得能在那樣的溫度下保持折疊、繼續工作,從而挺過每個PCR循環裡約95攝氏度的變性步驟。和其他DNA聚合酶一樣,它讀取單鏈模板、需要引物起頭、沿5'到3'方向逐個添加新的核苷酸,使A配T、G配C。因為它耐熱,你只需在開頭加一次酶,讓它跑完全部三十多個循環,而不必每輪都打開管子補加新酶。

在Taq出現之前,PCR是個笨拙的苦差:每次加熱都會殺死酶,所以每個循環都得人工補加。Taq把PCR變成可在熱循環儀裡自動運行的單管封閉反應——這才是PCR成為常規工具的真正原因。一個誠實的提醒:普通Taq沒有校對功能,因此偶爾會出複製錯誤。對要求序列忠實的應用,實驗室會改用帶校對功能的「高保真」聚合酶(如Pfu)。

研究者配好一管PCR,裡面有模板、引物、四種核苷酸原料、含鎂的緩衝液,以及一份Taq。把管子放進循環儀,無人值守地跑上數小時——耐熱的Taq挺過每一次95度的熔解,一路複製到最後。

耐熱的酶能挺過每一次變性步驟。

標準Taq沒有校對功能,因此偶爾出錯;當需要精確序列時,應改用帶校對功能的高保真聚合酶。Taq的發現也是「對極端環境微生物的基礎好奇心意外得到回報」的經典例子。

又稱
TaqTaq DNA polymerase耐热DNA聚合酶