基因組編輯與功能基因組學

CRISPR-Cas9系統(CRISPR-Cas9)

/ CRISPR = 'crisper'; Cas9 = 'cass-nine' /

CRISPR-Cas9是把基因編輯送到幾乎每個實驗室手中的工具,它並非憑空發明——而是作為細菌免疫的一部分被發現、再被改用。細菌不斷遭受病毒攻擊。為了自衛,許多細菌保存著一種分子「通緝照」檔案:它們把曾經熬過的病毒的DNA短片段,存在自身基因組中一個叫CRISPR陣列的特殊區域裡(這個名字描述的就是該區域奇特的重複模式)。細菌從這些存檔片段製造嚮導RNA,一種叫Cas9的蛋白質便用它們在下一次攻擊時辨識並切碎匹配的病毒DNA。這實際上是一套帶記憶的細菌適應性免疫系統。

突破在於意識到:這部天然的「搜索—切割」機器可以被瞄準我們所選的任何序列。Cas9是一種自己什麼也做不了的蛋白質,它必須裝上一段嚮導RNA。嚮導攜帶著大約20個字母的片段,與DNA目標鹼基配對——A配T、G配C——於是只要寫一段序列與你的基因匹配的嚮導,就能把Cas9引到那裡。Cas9一旦在一段叫PAM的短必需信號旁找到匹配序列,便夾住、解開DNA、核對匹配,再剪斷兩條鏈,留下一個雙鏈斷裂,交由細胞的修復完成為剔除,或在有模板時完成為精確編輯。

CRISPR為何改變了一切:用鋅指核酸酶或TALEN時,重新標靶意味著工程改造一整個新蛋白質;用CRISPR則保留同一個Cas9蛋白,只需訂購一段新的短RNA——既廉價、又快捷、還簡單。這使編輯變得平民化,並為珍妮弗·杜德娜和埃馬紐埃爾·沙爾龐捷贏得2020年諾貝爾化學獎。但它並非毫無瑕疵:它可能切到相似卻錯誤的位點(脫靶效應),PAM的要求限制了它能切的位置,把它遞送到正確的細胞裡也很難,而編輯胚胎更引出嚴重的倫理問題。

要使一個基因失活,你訂購一段嚮導RNA,其20個字母的序列與該基因中某個緊鄰PAM的位點匹配;與Cas9混合後,複合物找到該位點切割,細胞草率的修復便把該基因剔除。

同一個蛋白質,換掉RNA,就能指向任何帶PAM的地方。

CRISPR常被描述成「能在任意處以完美精度切割的基因剪刀」。實際上它需要附近有PAM,可能切到相似的脫靶位點,而且只負責斷開DNA——真正的編輯是由細胞、而非Cas9完成的。

又稱
CRISPRCas9CRISPR/Cas9规律成簇的间隔短回文重复規律成簇的間隔短回文重複