嚮導 RNA

嚮導 RNA 是告訴 Cas9 該去哪裡的地址標籤。Cas9 在每項任務中都一樣;變化的是它攜帶的那段短 RNA 序列,它拼寫出靶點。換一段嚮導,就能把這把剪刀重新指向一個完全不同的基因——正是這種可互換性讓 CRISPR 如此靈活。

嚮導 RNA 含有一段約 20 個核苷酸的區段(間隔序列),它透過維繫雙螺旋的那種 A–T、G–C 互補配對與 DNA 靶點配對。它還包含一段供 Cas9 抓握的結構支架部分。間隔序列的序列由實驗者選定,因此幾乎可以針對任何挨著合適 PAM 的位點進行編程。

在細菌中,嚮導由兩條獨立的 RNA(crRNA 和 tracrRNA)構成。為方便起見,實驗室工具通常把它們融合成一條單一分子,稱為單嚮導 RNA。設計好的嚮導很重要:選得不好的嚮導可能在別處結合相似但錯誤的序列,造成脫靶編輯。