前間隔序列鄰近基序

PAM 是 DNA 在 Cas9 切割之前必須出示的微型「口令」。即使嚮導 RNA 完美匹配,只要旁邊沒有一段特定的短序列,Cas9 也會忽略該位點。可以把它想成一位門衛,先查驗徽章再放剪刀進入。

PAM 代表「前間隔序列鄰近基序」:緊挨靶點的一段短 DNA 序列(對常用的化膿性鏈球菌 Cas9 而言,是 NGG 三個字母,其中 N 為任意鹼基)。Cas9 先辨識 PAM,再解開鄰近的 DNA,檢驗嚮導 RNA 是否與之配對。沒有 PAM,就不切割。

PAM 的演化是一種巧妙的「自我與非我」辨識:細菌儲存病毒間隔序列時不帶鄰近的 PAM,因此 Cas9 攻擊病毒 DNA,卻放過細菌自己存檔的副本。對編輯而言,PAM 的要求限制了可靶向的位點,不過具有放寬或改變 PAM 規則的工程化 Cas 變體如今擴大了可觸及的基因組範圍。