重組DNA與分子選殖

表位/親和標籤(epitope / affinity tag)

/ EP-ih-tope /

想像給一件物品縫上一個獨特的小把手,這樣你就能在人群中隨時抓住它或認出它。在蛋白工作中,生物學家正是這麼做:他們用基因手段在蛋白上加一段短的、標準化的序列,從而有一種可靠的辦法去檢測它,或把它從混亂的混合物裡拽出來。這個附加物叫標籤,而蛋白加標籤就構成融合蛋白。

標籤有兩種相互交疊的類型,都是透過把編碼標籤的額外DNA融合到你的基因上來附加,使蛋白在合成時就自帶標籤。表位標籤是一段短肽,一種眾所周知的抗體會緊緊結合它(例如FLAG、HA、Myc)。由於有現成的抗體辨識它,你就能檢測、定位或純化任何戴著該標籤的蛋白——當蛋白本身沒有好抗體時尤其方便。親和標籤則是一種能結合特定基質的標籤,讓你只需把細胞提取液流過該基質即可純化蛋白;標籤黏住,其餘一切被洗掉,再把純蛋白洗脫下來。經典例子是His標籤(六個組氨酸),它結合鎳柱。一個標籤常常同時擔任兩種角色。

標籤是蛋白純化和檢測的日常工具。它讓你能一步就從成千上萬種蛋白裡釣出某一種,用一種標準抗體在西方墨點法上檢測它,或捕獲它的結合夥伴(pull-down實驗)。代價與任何融合相同:標籤是外來的額外質量,偶爾會干擾折疊、活性或定位,所以標籤常被放在末端,有時事後還會用一種在內置位點切割的蛋白酶把它去掉。

給你的蛋白加上His標籤,並在大腸桿菌中表達。裂解細胞,把這鍋「湯」倒過鎳柱。你那帶His標籤的蛋白緊附在鎳上,其餘一切流走;一次沖洗把它清理乾淨,再用一種緩衝液一步就把純蛋白釋放出來。

His標籤讓一種蛋白緊附鎳柱,實現一步純化。

標籤是外來的額外序列,可能微妙地改變折疊、活性或定位——所以好的做法是核實帶標籤的蛋白仍表現得像天然蛋白,並在必要時去掉標籤。

又稱
protein tagHis-tagFLAG tagfusion tag标签蛋白融合标签