細胞生物學的方法與工具
細胞分級分離
/ sel frak-shun-AY-shun /
要研究汽車的某一個零件——比如只研究引擎——把車拆開、按大小和重量把零件分門別類會很有幫助。細胞分級分離對細胞做的就是這件事:它輕輕地把細胞破開,再把流出來的細胞器分成幾組,於是研究者可以收集到,比方說一管純淨的線粒體或純淨的細胞核,離開整個細胞那擁擠的混雜環境去研究它們做什麼。
首先,在冰冷、溫和的溶液中把細胞破開(勻漿),這種溶液能讓細胞器保持完整。得到的「湯」隨後放入離心機中旋轉,這台機器讓試管高速旋轉,於是就像泥漿在攪動過的杯子裡沉降那樣,較重的顆粒先沉下去。低速旋轉會把最大、最重的部分(如細胞核)沉澱到管底;把剩下的液體以更快的速度旋轉,會沉澱次重的部分(線粒體),依此類推。這種分步的做法叫做差速離心,它按大小和密度把細胞器分成不同的級分。
細胞分級分離之所以重要,是因為它讓生物化學家弄清哪個細胞器承擔哪項工作:你可以對一份分離出來的級分測試某個特定的反應,從而了解這個反應在細胞中通常發生在何處。在分子方法出現之前,它是繪製細胞功能圖譜的核心手段。它的局限是:把細胞破開會破壞其活體的組織結構,可能損傷或污染脆弱的結構,而且沒有任何一份級分能做到完美純淨——因此結果必須用顯微術等其他方法加以確認。
為了證明釋放能量的呼吸作用發生在線粒體中,科學家對細胞進行分級分離,收集線粒體沉澱,並證明僅憑這一份分離出來的級分就能進行呼吸作用的各項反應。
先慢速旋轉分出重的部分,再加快旋轉分出輕的部分——按重量把細胞器分類。
沒有任何一份級分能做到完美純淨,而把細胞破開會破壞其天然的組織結構——所以分級分離告訴你某個細胞器在試管裡能做什麼,未必精確等於它在完整活細胞內的行為。
又稱
另見