色谱与电泳方法
尺寸排阻色谱
/ SYZ iks-KLOO-zhun kroh-muh-TOG-ruh-fee /
想象一座满是小侧室的迷宫,各种身材的人在其中游走。小孩子总爱钻进每一间小室,于是要花很久才到出口;而高大的成年人挤不进去,便径直沿走廊大步前进,最先走完。尺寸排阻色谱分离分子正是这种“大的先出”的颠倒次序:按大小分,最大的最先离开。
严格地说,尺寸排阻色谱按分子能钻进多孔固定相孔隙的深浅来分离它们。大分子被多数孔隙拒之门外,只能走开阔的空间,因而很快离开色谱柱;小分子钻进孔隙、走更长的路,便较晚流出。理想情况下分子完全不黏附填料——分离纯粹来自每种分子所能探索的体积。
它之所以重要,是因为它温和而可预测,最适合按质量给蛋白质、聚合物等大分子分类,也适合把样品换进新鲜的缓冲液。它诚实的局限是分辨率一般且尺寸窗口固定:每根柱子只能在一定的尺寸范围内分离,大小太接近的分子,或意外黏上填料的分子,都无法干净地分开。
生化学家把蛋白质混合物上样到凝胶过滤柱上;大的蛋白质复合物最先冲出,小小的盐离子远远落后,于是她能收集到干净、无盐的纯化复合物组分。
大分子绕过孔隙最先离开;小分子被绕了远路最后离开。
用已知质量的分子标定色谱柱后,尺寸排阻色谱还能估算未知蛋白质或聚合物的分子量。
又称
另见