色谱与电泳方法

亲和色谱

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想象一道门口挂着恰好一种形状的钩子,只有你那件特定的外套才挂得上去。一大群人鱼贯而过,但唯有穿那件外套的人被勾住、被留下;其余的都径直走过。亲和色谱就是这样工作的——固定相上带着一把只抓住某一种特定分子、对其余视而不见的“锁”。

严格地说,亲和色谱靠一种高度特异、可逆的生物结合来分离目标分子——抗体对抗原、酶对底物类似物,或带标签的蛋白质对金属离子。一个结合配体被固定在固定相上;样品流过时,目标结合并被留住,其余一切被洗去,随后通过改变条件打断这种结合,把纯化的目标释放出来。

它之所以重要,是因为它能一步之内把单一想要的分子从极其复杂的混合物中拉出来,其纯度和选择性是任何通用方法都比不上的——它是蛋白质和抗体纯化的支柱。它诚实的告诫是:它需要一个特异的结合配体,而这可能昂贵或难寻;温和的结合可能脆弱;而强到足以释放被紧紧结合之目标的条件,有时也会损伤它。

为从一瓶细胞培养液中纯化一种抗体,生化学家让培养液流过一根带有该抗体特异抗原的色谱柱;唯有这种抗体黏住,其余一切被洗去,随后一次温和的 pH 改变便把它几乎纯净地释放出来。

一种“锁与钥匙”式的结合抓住一个目标分子,让其余一切冲过。

一种常见形式是组氨酸标签柱:蛋白质上经基因添加的标签结合固定的金属离子,使这一种蛋白质得以按需被捕获和释放。

又称
亲和色谱法affinity purification