Western印迹（Western blot）

Southern和Northern印迹检测特定的DNA和RNA。但基因最终是以蛋白的形式发挥作用的，而你常常想知道某种特定蛋白是否存在于样品中、又有多少。Western印迹回答的正是这个——它是印迹家族中的蛋白成员，把DNA探针换成了抗体。

首先，细胞提取液中的蛋白在凝胶上按大小分离（SDS-PAGE用去垢剂包裹它们，使其纯按大小迁移）。然后把它们转移到膜上，保留原有的图案。接着是蛋白特有的转折：你不用互补的核酸探针，而用抗体——一种免疫蛋白，以极高的选择性结合一种特定的靶蛋白（靠形状而非碱基配对来进行分子识别）。一抗黏附到你感兴趣的蛋白上；随后一种携带酶或荧光标记的二抗结合一抗，放大信号。抗体结合到哪里，那里就出现一条带。条带的位置确认蛋白的大小，其强度反映存在多少蛋白。

Western印迹是整个生物学和医学中最常用的技术之一。它确认你克隆的基因是否真的被翻译成了蛋白，检验某种蛋白在处理下变多还是变少，并检测像磷酸化这样的翻译后变化（用专门识别修饰形式的抗体）。它也是人们熟悉的一种诊断确认试验——历史上曾用于确认HIV抗体。它的局限在于特异性：结果的可信度不会超过抗体本身，而抗体可能结合到非靶蛋白上，给出误导性的条带。