基因敲入

基因敲入与敲除相反:你不是破坏一个基因,而是把新的内容写入一个精确的位置。这就像编辑文档时不是删词,而是在恰当的地方插入一段选定的语句——一个标签、一段校正后的序列,或一整个新基因。

从技术上说,敲入是在选定的基因组位置插入一段确定的 DNA 序列。常用配方是先制造一个定点切口(通常用 CRISPR-Cas9),再提供一段修复模板,其携带的新序列两侧带有与周围 DNA 匹配的区段。细胞的同源定向修复会把模板复制进去,使插入片段无缝地落在靶点。

敲入能实现多种目标:把致病突变校正回正常序列、给蛋白质接上荧光标签以研究它的去向,或为作物或细胞系添加有用的基因。它通常比敲除更难、效率更低,因为基于模板的精确修复要与细胞更快、更粗糙的末端连接相竞争。