苗头识别与筛选
细胞检测法
细胞检测法是在活细胞内、而非在装着纯化蛋白的试管里测试化合物——相当于把锁装回门上、放进房子里,并接通所有线路。如今化合物必须做到真药所要做的一切:进入细胞,在数以千计的其他分子中找到自己的靶点,并对活的机器产生可测量的效应。
用化合物处理细胞,并测量一个有生物学意义的变化:报告基因被点亮、某信号蛋白切换状态、细胞增殖或死亡、钙离子流,或高内涵显微成像。由于读出反映的是完整细胞内的事件,这里的苗头更可能转化为真实生物学——它已经证明自己能在活体情境中抵达并作用于靶点。
代价在于可解读性与噪声。细胞读出可能因许多原因而改变——化合物或许有毒、击中了脱靶、或根本进不了细胞——因此一个干净的效应本身并不能证明就是预期的机制。细胞检测法比生化检测法更杂乱、通量更低,这正是项目常把二者结合的原因:用生化检测法获取清晰的效力,用细胞检测法获取生物学相关性。
某报告基因细胞系在通路被抑制时发光;按化合物使信号变暗的程度排序,同时用平行的活力检测标出有毒的假象。
细胞读出捕捉生物学相关性,但必须提防毒性假象。
细胞效力读出务必搭配细胞毒性检查:一个仅靠杀死或拖垮细胞而“起效”的化合物,几乎会在任何细胞读出上模拟出真实效应。
又称
另见