細胞生物學的方法與工具
蛋白質印漬(Western blot)
/ WES-tern blot /
假設你想就細胞樣本中某一種特定的蛋白質回答兩個問題:它到底在不在,以及它有多少。蛋白質印漬正是做這件事的經典方法。它先把細胞裡所有的蛋白質按大小鋪展開來,再用一種特異形狀的抗體作為探針,挑出並顯現你所關心的那唯一一種蛋白質——確認它是否存在,以及它大致有多豐富。
這個方法分步進行。先用凝膠電泳按大小把蛋白質分離,最小的跑得最遠。分離開的蛋白質隨後從凝膠中轉移(「印」)到一張能把它們固定住的薄膜上。把一種針對目標蛋白質的特異抗體洗過薄膜,它只黏附到自己的目標上;接著第二種帶標記的抗體再附上去,恰好在目標所在之處產生一個可見的信號——一條深色的帶或一團光。帶的位置揭示蛋白質的大小,帶的深淺則大致反映存在的量。
蛋白質印漬是確認某種特定蛋白質是否存在、檢查其大小、以及在不同樣本之間比較其多少(例如病變細胞中某蛋白質比健康細胞更多)的標準手段。它的準確性取決於抗體是否真正特異,這一點和免疫染色一樣。它頂多算半定量——適合判斷「多」與「少」,而非精確的數字——而且和所有依賴抗體的方法一樣,如果抗體結合了錯誤的蛋白質,一條看起來乾淨的帶也可能具有誤導性,所以細緻的對照不可或缺。
為了檢查某種處理是否提升了一種關鍵蛋白質,研究者對處理過和未處理的細胞做蛋白質印漬;處理過那一道更深的帶表明,現在那種蛋白質的量更多了。
先按大小分離蛋白質,再用抗體探測,顯現選定的那一個目標。
蛋白質印漬只是半定量的,其可靠程度也僅取決於所用抗體:它顯示的是大致的「多」與「少」,而如果抗體結合了意外的蛋白質,一條令人信服的帶也可能是錯的,所以對照很重要。
又稱
另見