擴增、定序與核酸分析
桑格定序（Sanger sequencing）
/ SANG-er /
讀出DNA鏈上鹼基的精確順序——真正把A-T-G-C-C-A這樣一個個拼出來——是分子生物學的核心任務。第一個能乾淨可靠地做到這件事的方法由弗雷德里克·桑格於1977年發明，幾十年裡它就是讀DNA的方式。它建立在一個精妙的訣竅上：複製DNA，使副本在隨機而可控的位置上停下，再按長度把它們排序。
你用DNA聚合酶複製未知鏈，但在反應裡摻入一小部分特殊的「鏈終止」鹼基（雙脫氧核苷酸），它們一旦被加上，就阻止再接任何鹼基。於是新鏈不斷延長，直到偶然摻入一個終止子才停下。在大量分子中，這就產生了一梯子各種可能長度的片段，每個都以一個終止子結尾。當四種終止子帶上四種不同的螢光顏色，並把片段按長度分開（最短在前），從短到長依次讀顏色，就直接拼出了序列：長一個鹼基的那個片段的顏色，告訴你下一個鹼基是什麼。
桑格定序一次讀一個模板，產生一段約500到1000鹼基的高品質「讀長」。它是最初人類基因組計畫的引擎。儘管下一代方法如今以低得多的成本承擔了大規模定序的主體，桑格定序卻遠未過時：它的準確度和更長的單次讀長，使它成為確認單個基因、檢查選殖、或驗證可疑的下一代結果時受信賴的標準。它是那種細緻、定論性的讀取，而非大批量生產的那種。
為確認一個選殖，實驗室把它送去做桑格定序，收回一條由彩色峰構成的清晰圖譜：綠、綠、藍、紅、藍……從左到右讀，這些峰拼出A-A-C-T-C，是那段DNA毫不含糊的讀取。
按長度排序片段、讀出它們的顏色，就拼出了序列。
儘管有下一代方法，桑格定序並未過時——它長而高度準確的單次讀取，至今仍是確認單個基因、選殖或可疑變異的金標準；新方法勝在規模和成本，而非單次讀取的品質。
又稱
另見