光学光谱法与比尔定律

紫外–可见光谱法

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我们的眼睛其实已经在做一个粗略版本:我们靠橙汁和红酒吸收、反射的颜色把它们区分开。紫外–可见光谱法把这种能力延伸到紫外区,也就是紧挨着紫色、我们看不见的那段彩虹,并加以精确测量。

它属于使用紫外光和可见光的分光光度法家族——波长大约从 190 到 800 纳米。分子在其电子跃迁到更高能级时吸收这些波长,因此该技术探测物质的电子结构,并通过比尔–朗伯定律探测其浓度。

紫外–可见光谱仪是化学和生物实验室最常见的仪器之一,因为它快速、便宜、适用于溶液。它的局限在于选择性:许多不同的分子在彼此重叠的宽带里吸光,所以单凭它很难辨认混合物中的未知物。

生物学家通过测量提取出的 DNA 在 260 nm 和 280 nm 处的紫外吸光度来检查其纯度;260/280 比值接近 1.8 表示 DNA 干净、蛋白质污染很少。

分子生物学中每天都用的一项常规紫外–可见检查。

普通玻璃会挡住紫外光,所以紫外测量需要石英比色皿;塑料或玻璃比色皿只适用于可见光范围。

又称
UV-visible spectroscopyultraviolet-visible spectroscopy紫外–可见光谱法紫外–可見光譜法UV/Vis